 ������ TaKaRa MiniBEST Plasmid Purification Kit Ver.4.0�� �ҷ��� ������ �������κ��� plasmid DNA�� �ż��ϰ� ������ �� �ֵ��� ����� ��ǰ�̴�. �� ��ǰ�� ������ ������ �����ϴ� �������� SDS-alkaline lysis ����� ������� �Ͽ� plasmid DNA�� ���������� Spin column�� silica membrane�� �����ϴ�
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Reagent Set RNase A (10 mg/ml) 140 ��l Solution l 14 ml Solution ll��1 14 ml Solution lll��2 24 ml Buffer WA��2 28 ml Buffer WB��3 24 ml Elution Buffer 2 ml x 2 Spin Columns 50 Collection tubes 50 ���� �� ���
The QIAprep Spin Miniprep Kit is designed for isolation of up to 20 μg high-purity plasmid or cosmid DNA for use in routine molecular biology applications, including fluorescent and radioactive sequencing and cloning. Even higher yields (up to 30 μg) can be achieved using the High-Yield Supplementary Protocol. The QIAprep Spin Miniprep Kit can be automated on the QIAcube Connect. For optimal results it is recommended to use this product together with QIAvac 24 Plus. QIAprep Spin Miniprep standard protocols can also be executed using the TRACKMAN Connected system, paired with PIPETMAN M Connected pipettes, both from Gilson. The TRACKMAN Connected system guides researchers through the QIAprep Spin Miniprep protocols while automatically adjusting the Bluetooth-enabled PIPETMAN M Connected pipette settings. Each step of the protocol execution is recorded to accelerate reporting by generating a comprehensive run report. Download more information. In partnership with My Green Lab, we've also assessed the environmental impact of the QIAprep Spin Miniprep Kit (250). My Green Lab ACT (accountability, consistency, and transparency) environmental impact factor labels are designed to evaluate and score products on several sustainability criteria. These include:
Products are scored from 1 to 10 except for energy and water consumption, which are scored as 1 point per kWh or gallon, respectively. A low score means a lower environmental impact. You can view the ACT labels for the QIAprep Spin Miniprep Kit (250) in the Resources section below. For an eco-friendlier alternative to this kit, see our QIAwave Plasmid Miniprep Kit. <문제점 2> : 분리된 Plasmid DNA의 Quality가 낮은 경우. Plasmid DNA의 'Quality'는 분리 이 후 다양한 실험에서 매우 중요하게 작용. 핵산에 대한 전반적인 Quality를 판단할 수 있는 분석법은 본 블로그의 '핵산-1 : DNA' 중, 『DNA 농도(Concentration) 및 순도(Purity) 측정』 포스팅에서 기술한 것을 참고하시기 바라며, 본 내용은 Plasmid DNA 분리 과정에서 자주 발생되는 '분리된 Plasmid DNA의 Quality가 낮은 경우'에 대한 문제 해결법입니다. <경우 1.> 분리된 Plasmid DNA 용액 안에 salt(염) 농도가 높은 경우. - Salt 농도가 높은 것을 직접적으로 판단하기는 매우 어렵지만, 분리된 Plasmid DNA 용액 중, 높은 salt 농도는 클로닝을 위해 Plasmid DNA를 제한 효소(Restriction enzyme)로 절단하는 반응 등, 다양한 효소 반응 및 중합효소 연쇄반응(Polymerase Chain Reaction, PCR)과 같은 반응에서, 효율을 떨어뜨려 실험이 잘 안 되는 원인이 됨. - 이런 문제가 걱정될 경우, 다음과 같은 방법을 적용하여 salt 제거 효과를 높일 수 있음. (1) Alkaline Lysis법에서 에탄올 침전법으로 얻은 Plasmid DNA Pellet의 경우, (a) 실온에서 보관된 washing buffer (일반적으로 70% 또는 80% Ethanol)로 plasmid DNA pellet 을 washing. 차가운(ice-cold) washing buffer 보다 실온에서 보관된 washing buffer의 salt 제거 효과가 상대적으로 높기 때문.이 때, 70% Ethanol보다는 80% Ethanol을 사용 권장. (b) Plasmid DNA pellet의 양이 적어서 손실을 최소화하고자 할 경우, 차가운 washing buffer(-20℃ 보관)를 사용하면 상대적으로 washing 과정에서의 손실을 줄일 수 있음. 하지만, salt 제거 효과가 상대적으로 낮기 때문에 plasmid DNA의 washing 단계를 2 ~ 3회 반복 수행. 차가운 상태를 유지하기 위하여 냉각 기능이 있는 원심분리기를 사용하여 4℃에서 원심분리를 수행. (2) 상용화된 Spin-column 방식의 Plasmid DNA 분리 키트를 사용하는 경우. 일반적으로, 상용화 된 Plasmid DNA 분리 키트의 프로토콜에서는 washing buffer (일반적으로 70% 또는 80% Ethanol)는 실온에서 사용하도록 제시됨. (a) 상용화된 제품의 프로토콜의 washing buffer 적용 단계는 washing buffer를 column에 loading 후, 바로 원심분리하도록 제시되 있지만 salt 제거를 위하여 washing buffer loading 후, 5 분 정도 incubation후에 원심분리하여 washing 하면, 상대적으로 salt 제 거 효과를 높일 수 있음. (b) Plasmid DNA 양이 적어 손실을 최소화 하고자 할 경우, Plasmid DNA pellet에 적용한 것과 유사하게 차가운 washing buffer(-20℃ 보관)를 사용하여 plasmid DNA의 washing 단계를 2 ~ 3회 반복 수행. 차가운 상태를 유지하기 위하여 냉각 기능이 있는 원심분리기를 사용하여 4℃에서 원심분리를 수행. <경우 2.> 분리된 Plasmid DNA에 에탄올이 남아 있는 경우. 분리된 Plasmid DNA 용액에 에탄올이 잔류 (Residual ethanol) 여부를 확인 방법 중 하나는, 전기영동을 하기 위해 분리된 Plasmid DNA를 6x loading dye와 혼합하여 전기영동용 buffer에 담긴 agarose gel의 well에 loading할 때,에탄올이 남아 있는 Plasmid DNA는 가라앉지 못하고 떠 오름. (1) Alkaline Lysis법에서 에탄올 침전법으로 얻은 Plasmid DNA Pellet의 경우, 에탄올이 완전히 제거 되지 않은 pellet은 아직 '흰색 pellet'으로 보임(아래 그림 참조). 그러나, 완전히 dry된 pellet은 투명해짐. 그러므로, 실온에서 Plasmid DNA pellet을 말리거나, vacuum dryer와 같은 장비를 활용하여 Plasmid DNA에서 에탄올을 완전히 제거. (2) 상용화된 Spin-column 방식의 Plasmid DNA 분리 키트를 사용하는 경우, washing 과정에서 원심분리 하여 washing buffer를 제거 후, 남아있는 에탄올은 빈 column 원심분리 과정으로 완전히 제거하며, 경우에 따라 이를 2 번 정도 반복하고, elution buffer loading 전에 공기중에서 충분히 말림. <경우 3.> 분리된 Plasmid DNA 용액에 RNA가 포함된 경우. (1) Alkaline Lysis법에서 에탄올 침전법으로 얻은 Plasmid DNA Pellet의 경우, Dry된 Plasmid DNA pellet을 20 ug/ml 농도의 DNase-free RNaseA가 포함된 TE(pH8.0)로 녹임. RNaseA에 의해 RNA는 제거 됨. (2) 상용화된 Spin-column 방식의 Plasmid DNA 분리 키트를 사용하는 경우, Plasmid DNA 분리용 Buffer에 RNaseA를 첨가하지 않았거나, 시간이 지나면서 첨가된 RNaseA의 활성이 떨어져 분리된 Plasmid DNA 용액에서 RNA가 발견됨 (a) 각 상용화된 Plasmid DNA 키트 프로토콜에서 제시된 buffer에 RNaseA를 넣어서 사용. - Nanohelix 사 Fast-n-Plasmid Kit의 경우, Buffer S2에 RNase A 첨가. - Qiagen 사 QIAprep MiniPrep Kit의 경우, Buffer P1에 RNase A 첨가. (3) 상용화된 Spin column 방식의 Plasmid DNA Prep 키트의 경우, RNaseA가 포함된 Buffer는 4℃에 보관하며, RNaseA 활성에 대한 유효기간은 약 6개월 정도로 RNaseA의 활성이 떨어져 RNA 제거 효과가 낮을 경우, RNaseA를 추가로 첨가하여 사용 가능함. <경우 4.> 분리된 Plasmid DNA 용액에 genomic DNA가 포함된 경우. (1) Plasmid DNA 분리 과정에서 genomic DNA가 포함되는 경우는 주로, plasmid DNA 분리 과정 초기에 물리적인 충격에 의한 genomic DNA의 절단이 주된 원인임. Genomic DNA가 포함되는 것을 최소화 하기 위하여, Alkaline Lysis 법 및 상용화된 제품에서 모두 Solution I과 Solution II를 넣은 다음부터 vortexing에 의한 혼합은 금물이며, 반드시 Invert mixing에 의해 gentle하게 혼 합 해야한다. (2) Alkaline Lysis 법을 기준으로 Solution II를 넣은 후, Lysis 반응시간을 5분이 넘지 않도록 주의. (3) Plasmid DNA 분리를 위해 배양하는 대장균(E.coli)의 배양시간을 16 시간 이상 길게 배양하지 말 것.사멸기가 지속된 배양액 속에서 죽은 대장균으로부터 분해된 genomic DNA가 Plasmid DNA 분리 과정에 상대적으로 더 포함될 수 있음. 빠르고(Fast) 순수하게(Pure) Plasmid를 정제할 수 있는 방법.. HelixAmpTM Fast-n-Pure Plasmid Kit을 사용해 보세요! http://www.nanohelix.co.kr/shop/goods/goods_view.php?goodsno=36&category=002001 |
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